【CMDE】乙型肝炎病毒RNA（HBV-RNA）测定试剂盒（PCR-荧光探针法）注册技术审评报告公开

时间日期:2022-12-15

结案号：CSZ1900206

体外诊断试剂产品注册技术审评报告

软件英文版简称：乙型乙肝病毒码 RNA（HBV-RNA）测试实验试剂盒（PCR-荧光检测器法）

设备处理行业类别：第3类

申請人名号：武汉热景生物工程方法企业股票有限企业英文企业

祖国保健药品监管安全管理处

医疔仪器能力审评管理中心

几乎信息

一、申报人名号

南京热景菌物技术性股权有效工司

二、伸请人住所地

郑州市大兴区中关村新材料技术经济区大兴海洋生物医药财产公司财产示范园区天富街 9 号 9 幢

三、制作ip地址

首都市大兴区中关村科技开发物流园区大兴生物制品医疗家产营地天富街 9 号 9 幢

技术设备审评介绍

一、护肤品概要

(一) 服务主耍根据化学成分

本微生物培养基盒由 A 盒（磁珠法核酸提现微生物培养基）和 B 盒（扩张作用免疫试剂）构成，一般构成组成成分见表1。

实际信息内容具体情况见软件证明书。

（二）物品预测作用

本实验试剂盒中用身体之外降钙素原检测测定方法人血清样本量中的乙型慢性乙肝木马 RNA（HBV-RNA）。

至今的研究数据源现示，外周血血清中 HBV-RNA 可产生肝内 HBV 细菌的转录生物，在方面血清中HBV DNA 少于查测最高值的样表中，HBV-RNA 仍应该被查测到。同一时间，在NAs方法中，血清HBV-RNA 可配套为 HBeAg 转阴的分析的的质量指标其中之一，血清 HBV-RNA 没想到为阴，须要依照另外的的质量指标联合应用在培训 NAs 的方法。该检查结论不得当看作客户疾病严重品评的唯一一个招生指标，都要配合客户诊疗现象和其它的工作室检查对疾病严重对其进行综合管理介绍。本化学试剂盒不允许代替 HBV 的血管肿瘤筛查。

（三）服务木箱年纪

48 人份/盒。

（四）成品抽样检查方式

本采血管盒（PCR-荧光测试测试探针法）所采用磁珠法截取血清中的 HBV-RNA。炎症因子聊天地测试 HBV-RNA 的固执领域。测试采血管内有两条转变录引物、两对炎症因子聊天增加引物甚至两条荧光测试测试探针，与 RT-PCR 不良不起作用减慢液，Taq 酶，可逆录酶等主体配成成 RT-PCR 不良不起作用液，在实时视频荧光参考值 PCR 仪勤奋行那步法 RT-PCR 增加，控制对血清模板中 HBV-RNA 的测试。

二、诊疗前探索简要

(一) 最主要的原料料

1. 常见原资料料的决定

本食品的基本原料料例如：引物、探头、假病毒码、RT-PCR 响应制度（具有 10×RT-PCR Buffer（含 dNTPs）、逆袭录酶和 TaqDNA 配位聚合酶分层液）、磁珠法核酸拆分采血管等，这个原料料均是经由自购手段取得。在这其中，引物和电极均为提交申请者自主方案，由正规的人工我司人工和纯化后赢得。

办理人从有资格的生产商中，实现基本功用性检则，建立出最佳的钢筋取样料和生产商。制定方案了各关键钢筋取样料产品品质原则并经检则合理。

2.公司企业参考价值品设有事情

该厂品企业主考虑品还包括阳性反应考虑品、假阳性考虑品、高精度度关联性资料品、检测限关联性资料品、确切度关联性资料品、样品非线性关联性资料品、核酸获取功能性关联性资料品，关联性资料品选取临床实验样品化学合成而成。组合成如下所述：

呈抗体抗体阳性参照品共 10 份，依次起名为呈抗体抗体阳性参照品 P1~P10，种类于 HBV-RNA 呈抗体抗体阳性样版，包函B型、C型和D型。

阴决定性品共10份，各用命名规则为阴决定性品 N1~N10，包含正确人样版、变大胞宏hiv电脑病毒、EB宏hiv电脑病毒、人免疫系统常见问题宏hiv电脑病毒1型、丙型肝病病原体有哪些、甲型肝病病原体有哪些和梅毒样表。

高精度度基准品共 2 份，分别为定名为高精度度基准品 J1~J2，选取 HBV-RNA 阳性反应子样本系数稀释溶液而成。

检测限分类品 1 份，称为检测限分类品 S1，选用 HBV-RNA 抗体阳性模本直接稀释就可以而成，渗透压为 300copies/mL 。

应写度基准选取品共 5 份，对应重命名为应写度基准选取品 Y1~Y5，使用 HBV-RNA 弱阳样品均值希释而成，含量分离为2.0×107copies/mL、 2.0×106copies/mL 、2.0×105copies/mL 、2.0×104copies/mL、2.0×103copies/mL。

样版直线参照品 1 份，定名为样版直线参照品 L，使用 HBV-RNA 阳型样版溶解稀释而成。

核酸截取基本功能键可以参考选取品共 12 份，各自被命名为核酸截取基本功能键可以参考选取品 T1~T12，进来 T1~T8 选择含内源性侵扰产品的 HBV- RNA 抗体阳性样版扑灭而成，T1、T5、T9 含猩红球蛋白，T2、T6、 T10 含甘油三脂，T3、T7、T11 含总 IgG，T4、T8、T12 含总胆红素，T9~T12 为假阳性血清样版。

之内临床药学范例利用数据 PCR 法和实时更新荧光 PCR 法使用证明。各中小企业基准品使用于厂品更准性、特男人、检测工具出限、细密度、直线、核酸获取功效等的检测工具。

本化学化学试剂盒设立了阳型质控品和阴属性控品，使于测试全过程中化学化学试剂盒和机器设备的产品控住。除此之外，每隔模板均测试 1 个内标，使于鉴定核酸提现和 PCR 增加的产品和导致的判读。

(二)制作的工艺及想法采集体系研究探讨

申报人对制剂盒反馈保障体系的学习分为对 HBV-RNA 特女性朋友引物/检测器浓硫酸渗透压真实定、内标引物/检测器浓硫酸渗透压真实定、现象液的选用、现象质量分数真实定、核酸生成化学制剂真实定、DNA 酶 I 的的使用量敲定等；对反馈要求的研发涉及 PCR 热处理回火气温、测序循坏数、测序反馈时期，DNA 酶 I 的影响气温和时期的选择和网站优化；对样本量水量、内标水量、核酸导入固体积等展开了深入分析。

注册人可以通过渗透性性检测，判断了最合适的症状装修标准。并选择化学药品盒中化学药品及引擎的重要加工制造加工的调查结局，判断了最合适的加工制造加工。

（三）定性分析效能评估方法

该產品研究分析性能方面分析信息内容也包括核酸领取功效、检测出限、线形时间范围、较准度、高精密度、分享活性聊天（相交反應、不侵扰物资）、HBV DNA 不侵扰酸度等。请求人修改资科了能够运营的特点管理体系中下研发的三批成品在 3 种用于舱位（ ABI Prism7500、LightCycler480、厦门博日 9600plus）上的特点测评资科。

在核酸领取的功能测试中，公司申报者选择内含 28mg/dL 总胆红素、22g/dL 赤红球蛋白、3000mg/dL 甘油三酯、40g/L 总 IgG 的 HBV-RNA 阴血清样例摇匀给定氧化还原电位的HBV-RNA 强阳型样例，备制成高、低氧化还原电位样例完成钻研，结果显示反映出以上的干扰信号物对核酸领取稳定性无干扰。

在验出限的耐热性测试中，使用人对 HBV-RNA 临床实践血清范例（B 型、C 型、D 型）和 HBV-RNA 假细菌范例（A 型、E 型、F 型、G 型）实施梯度方向稀释溶液溶液，主要包括三批号生化试剂对新产品系列浓硫酸酸度范例分开实施 20 次再次查测，以≥95%抗体阳性查出率的最低的稀释溶液溶液浓硫酸酸度作查出限，终究认定该新产品查出限为 300copies/mL。主要采用三批化学药品对 HBV-RNA 药学血清样品（B 型、C 型、D 型）和 HBV-RNA 假艾滋病毒样品（A 型、E 型、F 型、G型）开展检则出限的反复性检则检验，适合检则出限的的性能规范。

在线形比率内的性能参数考核中，申請人用到有所不同基因遗传型的模板，依次制取 9 个氧浓度的模板实施线形比率内分析，新产品在1.0×103copies/mL~1.0×108copies/mL 位置氧化还原电位呈波形涉及到，波形涉及到因子 r＞0.9800，具有波形位置的效果特殊要求。

在为准度的效果评诂中，伸请人主要采用 HBV-RNA 阴性化范本对阳性反应范本参与编稀释液，都化学合成成 2.0×107 copies/mL、2.0 × 106 copies/mL 、2.0 × 105 copies/mL 、2.0 × 104 copies/mL、2.0×103 copies/mL 共 5 个等度样品实现精准度探讨，结局认为检查氧溶液浓度的多数值与本体论氧溶液浓度的多数值的完全偏离不少于±0.五类多数的数量级，符合标准精准度的使用性能特殊要求。

在高精密五金度的能力分析评估中，办理人对高、中 2 个质量浓度的 HBV- RNA 高精密五金度范例对其确定测量，分离对批内、批间测量成果对其确定研究分析，没想到表述精密模具度样本量的基因变异公式均不过于5%，完全符合精容重的能规范。

分析一下活性聊天研发包函交叉式发应和影响研发。重叠反應的使用性能评定中，伸请人对人必有妖胞电脑蠕虫宏艾滋电脑木马木马、EB 电脑蠕虫宏艾滋电脑木马木马、人们免疫性常见问题电脑蠕虫宏艾滋电脑木马木马、丙型乙肝电脑蠕虫宏艾滋电脑木马木马、甲型乙肝电脑蠕虫宏艾滋电脑木马木马、梅毒、人们泡疹电脑蠕虫宏艾滋电脑木马木马 6 型、只是泡疹电脑蠕虫宏艾滋电脑木马木马 1 型、只是泡疹电脑蠕虫宏艾滋电脑木马木马 2 型、甲型流行性感冒电脑蠕虫宏艾滋电脑木马木马、丙酸痤疮杆菌、两面金茶色提子球菌、暗红色念珠菌样版对其进行交叉的情况反馈评定。可是出现，上述内容样本量与本食品均不生成双向反映。

要素科研完成实验中，报名人按照在中低氧化还原电位的 HBV-RNA 样品中放入要素物质的方式完成确认，拉米夫定（1.3μg/mL）、阿德福韦酯（21.24ng/mL）、恩替卡韦（3.46μg/mL）、替比夫定（3.69μg/mL）、常见的 IFNα（2020pg/mL）、聚乙二醇要素素α（10.88μg/L）、总胆红素（≤28mg/dL）、甘油三酯（≤3000mg/dL）、赤红血清（≤22g/dL）、总 IgG（≤ 40g/L）及不少于 2×107 IU/mL 的 HBV DNA 对本产品设备检则毕竟均不发生要素。

（四）弱阳判别值或分类时间研究分析

本厂品的抗体阳性诊断值调查，采取乙肝两对半细菌携带者的血清样板（B 型、C 型、D 型）及不同于人的阴性化血清模板共 249 例，用本实验试剂盒对其参与阳型决定值论述，对检测工具靶标 Ct 值对其参与 ROC 分析一下，知道其阳型决定数值为靶标 Ct≤26。确认对 HBV DNA 弱阳/呈弱阳性反应、HBsAg 弱阳/呈弱阳性反应及 HBeAg 弱阳/呈弱阳性反应样例的靶标做好 Ct 值讲解，HBV DNA 抗体弱阳/阴、HBsAg 抗体弱阳/阴及 HBeAg 抗体弱阳/阴对靶标抗体弱阳鉴别值的直接判断无后果。

本产品设备预计 HBeAg 转阴的阳性反应断定值论述，按照 79 例慢性病HBV皮肤病毒感染者（B 型、C 型、D 型）列队血清范本（0 周、48 周、5年），选择本生化试剂盒进行测试，对测试最终各是计算 B、C、D 型的 ROC 直线和更好预计 cutoff 值，最终显视均不具备着不错不同之处；将 B 型、C 型、D 型范本合并为相互之间适用确定好预计医治 5 多年后 e 抗原转阴的更好 cutoff 临界值 708copies/mL。这个时候的 PPV 为 81.8%，NPV 为 87.0%。

（五）安全稳定义探索

申請人对本产品的的实时更新保持热稳定性分析、拧开及冻融数次局限稳相关性、运载稳相关性来完成了理论的研究，同時，对范本的稳相关性也来完成了理论的研究，确实了在各方面必备条件下本服务及范本的有效的包存时间间隔。

城市热力图安全性：将三批次线微生物培养基的 A 盒放置在 10~30℃，B 盒放置在-20 ± 5℃的前提状况下存有，不间断 7 月对微生物培养基盒的表面、阴呈阳性达到率、排除限、平滑、合理度、精密机械度开始考察学习，多种性能方面招生指标均达到规范，判定服务在法规的处理前提状况下，可安全存有 6 月。

前者，提交申请者对护肤品的拧开及冻融时间可能比较稳界定、车辆运输比较稳界定和样本量比较稳界定差别做好了探讨。毕竟展现，护肤品的稳定性均够满足產品阐明书谎称的请求。

三、临床医学评议说明

注册人到中心城市医学院校本科加盟东莞佑安宠物卫生院、银川学校本科第2宠物卫生院、锦州市最后公民宠物卫生院共 3家医院完毕了诊疗上经过多次实验发现，对判断免疫试剂查测人血清中 HBV-RNA 的诊疗上准确度性和诊疗上合理高效性展开手机验证。

(一)临床上较准性认可

采用了考核内容采血管与参打无边无际案对临床药学检验范例做出较好探索经过多次实验发现的方案认证本车辆的临床药学检验准确度性。入组范例为急慢性 HBV 病毒者、某些脾脏病毒侵扰范例并且非脾脏病毒的常见人血清范例，总计下来 1033 例。参打无边无际案首选 ABI QuantStudio 3D处理芯片数字化 PCR 系統。

临床上上精确度性探讨在 3 家临床上上厂家共测量了 1033 例血清子样板，实际情况收入测量 1033 例，涉及急性 HBV 沾染者子样板 709 例（68.64%），相关脾脏发病要素子样板 78 例（7.55%），非肾脏器官的疾病的顺利人模板 246 例（23.81%）；675 例有分析毕竟的样品中，B 染色体型 160 例、C 染色体型 464 例、D 染色体型 51 例。

对1033例入组血清样例开展年终考核化学试剂和参圆得法完全合适率深入分析，弱阳完全合适率 99.26%（95%CI：98.11%~99.80%）、呈阴性完全合适率98.99%（95%CI：97.65%~ 99.67%）、总的完全合适率 99.13%（95%CI：98.35% ~ 99.60%）；Kappa（K）=0.983，奖惩化学制剂和参钢巴法兼备很好的相同性。

相应的性定量阐述展现考核内容采血管和参圆得法的曲线相应的常数 r=0.9864 ，再战定量阐述算出的曲线再战式子为 y=0.9854x+0.1123，在这当中截距 a 的 95%的置信范围为[0.0255，0.1992]，斜率 b 的95%的置信范围为[0.9693，1.0015]。

对 675 例有dna临床表现的数据的范例检查测量结论实施定量分析。B dna型血清范例，绩效考核办法办法免疫化学药品与参比喻法量检查测量结论的相原因数 r=0.9873，线形归队式子组为 y = 0.9973x + 0.0083，截距 a 的 95%置信差值为[-0.1876，0.2042]，斜率 b 的 95%置信差值为[0.9625，1.0321]；C dna型血清范例，绩效考核办法办法免疫化学药品与参比喻法量检查测量结论的相原因数 r=0.9853，线形归队式子组为 y = 0.9876x + 0.1229，截距 a 的 95%置信差值为[0.0161，0.2296]，斜率 b 的 95%置信差值为[0.9672，1.0080]；D dna型血清范例，绩效考核办法办法免疫化学药品与参比喻法量检查测量结论的相原因数r=0.9918，线形归队式子组为 y = 1.0241x - 0.1546，截距 a 的 95%置信差值为[- 0.4375，0.1290]，斜率 b 的 95%置信差值为[0.9748，1.0732]。考核方案化学药品与参目空一切法的一定量加测最后（lgcopies/mL）之差在±0.5 范围图内。

结合以上表明，申请表人考评制剂与参例如法检查测量效果一致性。

(二) 临床药理有效的性探索

本深入分析中分发型别对业绩考核化学试剂降钙素原测试测试血清 HBV-RNA 用到预测 NAs 诊疗求美者 HBeAg 转阴、HBV DNA 低氧浓度的 CHB 求美者中HBV-RNA 的检测出率开始诊疗可行性理论研究。

1.考核表生化试剂定量分析监测血清 HBV-RNA 中用精准预测 NAs 抵抗疾病毒诊治人群 HBeAg 转阴探析

通过检查制剂对原因于回顾与展望性链表样本量的 78 个患有（接受 NAs 抵抗毒缓解的 HBeAg 阳性反应慢性的 HBV 病毒病提高）的共 624 例血清样版去 HBV-RNA 降钙素原查测查测，没个提高获取 8 个样本，主要表示缓解前和缓解中的 8 个与众不同查测点：即 NAs 身体毒方法第 0 周、24 周、48 周、1.5 年、2 年、3 年、4 年、5 年。优化诊治第 48 周血清样表中的 HBV DNA、HBV-RNA 一按量值用于介绍诊治五年期后（一两个诊治寿命）HBeAg 转阴的受试者事业结构特征曲线方程（ROC）介绍和此类一按量值对 HBeAg 转阴的介绍值介绍。

阐述的结果展现，NAs 中成药治療的 78 例 HBeAg 呈阳性提高中，治療 48 周 HBV DNA 参考值和 HBV-RNA 参考值估计 NAs 中成药治療多年后 HBeAg 转阴的的身材曲线以下积（AUC）由大到为 0.736 和 0.874。

HBV DNA 以 156.0 IU/mL 为域值自主的预侧进行医疗 5 年 HBeAg 转阴的弱阳反应预侧数数指标值 60.9%，阴预侧数数指标值 84.4%；HBV-RNA 以 708 copies/mL 为域值自主的预侧进行医疗 5 年 HBeAg 转阴的弱阳反应预侧数数指标值 80.6%，阴预侧数数指标值 83.3%。HBV-RNA 在进行医疗 48 周后预侧10年 HBeAg 转阴的预侧作用远低于血清 HBV DNA 的预测商业价值。

2. HBV DNA 浓度计算公式值 HBV 妇科病患者中 HBV-RNA 查出率科学研究

此前临床护理耐压试验共一般包括 374 例 HBV DNA 低浓硫酸浓度（＜500IU/ml）或未检测样本量，至少 HBV DNA 阴性反应 227 例。在 HBV DNA 呈阴性样本量中，HBV-RNA 查出抗体呈阳性 145 例，抗体呈阳性查出率有 63.88%（145/227）；在 374 例 HBV DNA＜500IU/mL 的急慢性 HBV 沾染者模板中，HBV DNA 检测阳型 147 例，阳型检测率 39.30%（147/374），HBV-RNA 检测阳型 249 例，阳型检测率66.58%（249/374），χ2=54.26，P＜0.05，具备为显著异同。可以看到在 HBV DNA 低有机废气浓度或未验出的急性 HBV 感动者中，HBV-RNA 具备有较高的排除率。

以上所讲，临床药学药学现场实验结果凸显凸显本服务的临床药学药学的性能考虑技术审评让。

四、类产品获益危险辨认

(一) 开始反击评诂

本设备用于于对乙型肝病病症病症病菌交叉感染的助手评估，也能够对 NAs 的调理体验制作出分折。中国国家乙型肝病病症病症病人群相对多， NAs 调理能够提升乙型肝病病症病症病人群的医治率，设定监测站 HBV DNA 应该普遍存在漏检安全风险，研发是因为，采用对 HBV DNA 早就监测站不超过的病人群使用 HBV-RNA 的监测站，能够助手对病人群培育使用监测站。

(二) 风险存在评价指标

该化学试剂盒己知和可可预见性的安全性概率常见有下类这些领域：

1. 与预期目标不同的用途关与的安全可靠危害性，举个例子本类产品的判断的结果非用户病状评述的真正评价指标，未结合在一起用户临床上表达和某些实验英文室判断对病状做好综和分折。

2. 与产出关于的安全保障风险点，列举运行未通过核验或考察很完成的原料料。

3. 与运输配送物流与存储关以的很安全危险因素，列如采血管的运输配送物流和存储达到设定必备条件。

4. 与可靠施用想关的可靠危险因素，举列可靠施用检测仪器和生化试剂时并没有依照规定原因分析书需求开展的操作。

5. 生物技术危险性，举列进行丟掉实用后或就失效的新成品或新成品实用过程中中有的垃圾物未以医疗保障垃圾物相同注销治理。

经过对乙型肝炎病症电脑病毒 RNA（HBV-RNA）测试化学药品盒（PCR- 荧光测试探针法）从生育原料料、配成、验测、包裝、运输业、存贮、便用手段及的健康很安全重视应当、另存和用后办理等全期间威胁辨别、危险掌握显著性检验、怎样预防消除，从设备技術的规定和便用就服务使用指南及各个企业章程机制对设备质量管理的全期间掌握和危险掌握以应急处置制保护，尚未设备的的健康很安全危险掌握公式降下来了报验守则的规定的可联受规模内，互相选择减小危险掌握的控制保护后未获取新的危险掌握。在近几年为止群体行为水平面上，人相信该设备挂牌上市有的回报多于危险掌握。一直以来近几年为止人相信该化学药品盒的回报多于危险掌握，有时候为衡量用械的健康很安全，为对包括乘余危险掌握的应急处置，已在该化学药品盒就服务使用指南中警告下例资料：

1.预期的不同的用途：

本化学制剂盒适用休外一定量法测定人血清范本中的乙型肝病病毒 RNA（HBV-RNA）。

现有研究探讨参数展现，外周血血清中 HBV-RNA 可造成肝内 HBV 病毒感染的转录渗透性，在大部分血清中 HBV DNA 最低加测底限的样板中，HBV-RNA 仍会被加测到。一并，在 NAs 疗法中，血清 HBV-RNA 可輔助有所作 HBeAg 转阴的预侧的指数一种，血清 HBV-RNA 最终成果为阴性反应，须得依照其余指数同时适用于的指导 NAs 的疗法。该加测最终成果不了有所作病患者身体状况考核的独一指数，必须搭配求美者临床使用实验具体表现和许多使用验室检验对培育使用总合了解。本化学药品盒不可主要用于 HBV 的血夜肿瘤筛查。

2.提醒及准备应当：

该化学药品盒代表书中清晰了该化学药品盒考察的方法的特殊性性及注重问题。

基础性口碑个人意见

本申办好项目为镜内3、类医治用具新产品登记。办理人的申请网上申报知料合乎现行制度规定，前提条件《医治器具监督检查安全管理法规》（云南省人民政府令第 680 号）、《身体外测试微生物培养基注册成功管理工作土办法》（原的国家调味品货品参与操作质监总局令第 5 号）等相关的诊疗设备条例与配建章程，经体统点评后，个人建议准予备案。

2022 年 11 月 10 日

抄送：成品反映书

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